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Flashcards in Modifizierende Enzyme Deck (16)
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1
Q

Was für wichtige Arten von modifizierenden Enzymen gibt es?

A

Ligasen, Phosphatasen, Kinasen, Transferasen

2
Q

Was ist die Eigenschaft einer Ligase?

A

Sie verknüpft das 5’-Phosphatende mit der 3’-OH-Gruppe zweier DNA-Stränge

3
Q

Was für Anwendungen gibt es für Ligasen?

A

Ligation von DNA-Enden (z.B PCR-Produkte in Vektor)

Verknüpfung von Bruchstellen in DNA

4
Q

Welche Bedingungen benötigen Ligasen?

A

Mg2+ & ATP

5
Q

Wie lange dauert die Ligation von Sticky-ends und bei welcher Temperatur findet sie statt?

A

10 min - 1h bei Raumtemperatur

6
Q

Wie lange dauert die Ligation von Blunt-ends und bei welcher Temperatur findet sie statt?

A

Übernacht bei 15°C

7
Q

Warum ist die Temperatur bei der Ligation von blunt-ends niedriger als bei der von sticky-ends?

A

Durch die niedrigeren Temperaturen wird die molekular Bewegung reduziert, wodurch die Fragmente besser zusammengesetzt werden können.

8
Q

Was ist die Eigenschaft von Phosphatasen?

A

Hydrolysiert die 5’-Phosphatgruppe von DNA, RNA, etc.

9
Q

Wofür werden Phosphatasen angewendet?

A

Dephosphorylierung von Vektorenenden, um zu Verhindern, dass sich ein Vektor ohne den Einbau eines Inserts wieder schließt (reduzierung der Religationsrate).

10
Q

Was für Bedingungen benötigen Phosphatasen?

A

alkalischer pH

Mg2+

11
Q

Was sind die Eigenschaften der T4-Polynucleotid-Kinase?

A

Übertragen das 𝛄-Phosphat von ATP auf das 5’-Ende von Nukleotiden

12
Q

Wofür wird die T4-Polynucleotid-Kinase verwendet?

A

Phosphorylierung von PCR-Produkten

5’-Endmarikierung von DNA, RNA und Oligonukleotiden

13
Q

Welche Bedingungen benötigt die T4-Polynucleotid-Kinasen?

A

Mg2+, ATP, reduzierendes Milieu

14
Q

Was sind die Eigenschaften der Transferasen?

A

Hängt Nukleotide an freie 3’-OH Gruppen an

15
Q

Wofür werden Transferasen verwendet?

A

Homopolymerschwänze

3’-End Markierung von DNA

16
Q

Welche Bedingungen benötigen Transferasen?

A

Mg2+ & dNTPs