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Flashcards in Nukleasen Deck (23)
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1
Q

Allgemein: Was bewirken Nukleasen?

A

Sie schneiden Nukleinsäuren

2
Q

Wie werden Restriktionsendonukleasen benannt?

A

Name des Organismus + Nummer des Restriktionsenzyms

3
Q

Wie viele Typen von Restriktionsenzymen sind bekannt?

A

3

4
Q

Was sind die zwei Aktivitäten von Restriktionsendonukleasen?

A

Nuklease-Aktivität

Methylase-Aktivität

5
Q

Wofür ist die Nuklease-Aktivität der Restriktionsendonucleasen?

A

Zum spalten des Zucker-Phosphat-Rückgrates der Nukleinsäuren

6
Q

Wofür ist die Methylase-Aktivität der Restriktionsendonukleasen?

A

Für die Methylierung der Erkennungssequenz

7
Q

Restriktionsendonukleasen sind ____________ . Das __________ dient dem Schutz der eigenen DNA.

A

Restriktionsendonukleasen sind methylierungsabhängig. Das Methylierungsmuster dient dem Schutz der eigenen DNA.

8
Q

Was sind die Eigenschaften von Restriktionsendonucleasen des Typs I?

A

Komplex aus mehreren Untereinheiten

Gleichzeitig Methylase- und Nuclease-Aktivität

spezifische 15 bp Bindungsstelle

Schneiden zufällig ca. 1000 bp entfernt

Abhängig von ATP, Mg2+ & S-Adenosylmethionin

9
Q

Was sind die Eigenschaften von Restrictionsendonucleasen des Typs III?

A

nicht-palindromische Erkennungssequenz

schneidet in einen definierten Abstand ca. 5 - 15 bp neben der Erkennungssequenz

bildet distinkte Fragmente

benötigt ATP & Mg2+

10
Q

Was sind die Eigenschaften von Restrictionsendonucleasen des Typs II?

A

Nuclease- und Methylierungs-Aktivität liegen auf getrennten Enzymen

extrem spezifische palindromische Erkennungssequenz (meist 4-8 bp)

Bindungs- und Schnittstellen sind identisch

jedes mit spezifischen Puffer-Anforderungen

11
Q

Welche zwei Arten von Enden gibt es nach dem Verdau mit Restriktionsenzymen?

A

Sticky- & Blunt-ends

12
Q

Was ist der Vor-/Nachteil an Sticky-ends?

A

Die Nukleinsäure-Moleküle lassen sich leicht wieder zusammenbauen, jedoch sind nur weniger Kombinationen möglich

13
Q

Was ist der Vor-/Nachteil an Blunt-ends?

A

Es gibt viele Kombinationsmöglichkeiten, jedoch sind die Moleküle schwieriger wieder zusammen zu fügen

14
Q

Wie lässt sich bei Stick-ends die Anzahl der Kombinationsmöglichkeiten erhöhen?

A

Restriktionsenzyme, die unterschiedliche Erkennungssequenzen haben, können zueinander passende Enden produzieren, sodass viele Kombinationen möglich sind.

15
Q

Was sind Isoschizomere?

A

Restriktionsenzyme mit gleicher Erkennungssequenz, die an der gleichen Stelle schneiden.

16
Q

Was sind Neoschizomere?

A

Restriktionsenzyme mit gleicher Erkennungssequenz, die an einer anderen Stelle schneiden.

17
Q

Was sind Methylierungspaare?

A

Enzyme mit gleicher Erkennungssequenz aber unterschiedlicher Methylierungsabhänigkeit

18
Q

Wie ist die Einheit zur Aktivität von Restriktionsenzymen definiert?

A

Eine Einheit eines Restriktionsenzyms ist die Menge an Enzym, die 1 mikrogramm DNA des Phagen 𝝀 in einer Stunde in speziellem Puffer bei 37°C vollständig verdaut.

19
Q

Was sind die Probleme mit der Definition zur Aktivität von Restriktionsenzymen?

A

Zahl der Schnittstellen unterschiedlich

𝝀-DNA ist linear

Manche Enzyme haben nicht bei 37°C ihren Optimumsbereich

20
Q

Wie wird ein Restriktionsverdau pipittiert?

A
  1. x mikroliter H20
  2. 2 mikroliter 10-fach Puffer
  3. x mikroliter DNA
  4. ( x mikroliter BSA)
  5. 0,x mikroliter Enzym

→ insgesamt 20 mikroliter

21
Q

Wie spalten Nucleasen Nukleinsäuren?

A

Sie spalten die Phosphordiester-Bindung innerhalb von Nukleinsäuren

22
Q

Was für 2 Arten von Nukleasen gibt es?

A

Exo- und Endonukleasen

23
Q

Was ist der Unterschied zwischen Exo- und Endonukleasen?

A

Exonukleasen: Spalten vom Ende einzelne Nukleotide ab

Endonukleasen: spalten beliebig innerhalb von Nukleinsäuren